切片制备：将组织块平放于软塑料盖或特制小盒内（直径2cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮内，大约10-20秒组织即迅速冰冻成块。取出组织冰块立即置入-80℃冰箱储存备用，或置于恒冷切片机冰冻切片。冰冻切片4~8mm，冰冻切片后如不染色，必须吹干，储存低温冰箱内，或进行短暂预固定后储存冰箱内保存。
1. 冰冻切片室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，也可根据需要选择其他方式。PBS洗，5min，3次；
2. 3% H2O2去离子水37℃孵育10min，PBS洗，5min，2次；
3. 5～10％正常山羊血清封闭，37℃孵育10-20min，倾去血清，勿洗；
4. 适当比例的一抗工作液孵育，4℃过夜或37℃ 1～2h；
5. 复温20min，PBS洗3min，三次；
6. 二抗孵育：加生物素化标记二抗，37℃，10-15min，PBS洗3min，三次；
7. 三抗孵育：加辣根酶标记的链酶卵白素，37℃，10-15min，PBS洗3min，三次；
8. 加DAB显色剂显色（或AEC显色），镜下观察结果，适时终止；
9. 苏木素复染5min，自来水冲洗片刻，75%的盐酸酒精溶液分化30s，自来水冲洗5min蓝化；
10. 脱水。依次经过70%、80%、90%、95%、无水乙醇，各2min，二甲苯15min，三次；
11. 封片，中性树胶封片。
光学显微镜100×或400×观察，拍片。
图象评分。