细胞免疫组化参考实验步骤

作者：江苏镇江厚普生物科技有限公司  来源：抗体技术部  发表时间：[2011-11-5]  点击：3992

1. 细胞爬片；

2. PBS清洗标本 3次，各1 min。

3. 冷丙酮4℃固定15min（或用4%多聚甲醛室温固定10~20min）；

4. 空气干燥5min，PBS漂洗3min，3次；

5. 细胞通透：0.5% Triton X-100（溶于PBS）通透细胞，室温15~30min（丙酮固定法不用此步骤）；

6. PBS漂洗2次，每次5min；

7. 3% H₂O₂去离子水室温孵育10min，PBS洗；

8. 正常山羊血清封闭，37℃孵育10~20min，甩掉封闭液，勿洗；

9. 加适当比例的一抗工作液孵育，4℃过夜或37℃ 1~2h；

10.  PBS漂洗2次，每次5min；

11. 加入酶标二抗工作液，37℃，30-60min；

12. PBS漂洗2次，每次5min；

13. 加DAB显色剂显色（或AEC显色），镜下观察结果，适时终止；

14. 苏木素轻度复染；

15. 脱水透明。

16. 封片，中性树胶封片。

光学显微镜观察，拍片。图象评分。